Медицинский центр «Геномед»
Бесплатная горячая линия:
8-800-333-45-38
Заказать обратный звонок
Медико-генетический центр
лаборатория молекулярной патологии
Все контакты

        Гены группы Rh

 

     У людей с отрицательным резус-фактором есть мутации или отсутствует полностью ген RHD, кодирующий белок  RhD, но почти у всех людей на поверхности эритроцитов есть полиморфный белок  RhCcEe, кодируемый геном  RHCE.  Таким образом, фенотипы  Rh крови человека зависят от генов RHD и RHCE, пары гомологичных генов на коротком  плече хромосомы 1 (1p34-36), которые имеют по 10 экзонов.  Белки RhCcEe  и RhD  имеют схожие структуры, отличаются они лишь на 35–36 аминокислотных остатка (в зависимости от  RhC/c и E/e статуса группы крови).

 

  Иммунологическая несовместимость плода  и матери по резус-фактору является основной причиной гемолитической болезни новорожденного. В некоторых случаях воздействия антигенов, проникающих через плаценту, приводят к гибели плода. 

 

     БелокRhD является  самым иммуногенным белковым антигеном группы крови у людей. У европейцев фенотип  «RhD–»  почти всегда обусловлен отсутствием гена  RHD вообще. Большинство людей с положительным резус-фактором имеют два одинаковых или разных аллеля гена RHD.

 

     У большинства европеоидов делеция гена  RHD  вызвана, возможно, неравновесием по сцеплению между двумя гомологичными последовательностями участка гена  RHD, определяющего резус-принадлежность индивидуума. Предполагается, что определение делетированного гена  RHD  сможет упростить детекцию аллелей (для прогнозирования гомозиготоности/гетерозиготности по гену  RHD  у будущих отцов).

     Однако, к сожалению, делеции внутри участка гена  RHD, ответственного за резус-принадлежность, многочисленны, что делает применение диагностических наборов в таких случаях крайне сложными в клинических масштабах.

 

     Сложная система генов группы крови  Rh  имеет многочисленные варианты. Существуют различные гаплотипы, в которых ген  RHD  представлен полностью или частично. В случае неполных фенотипов  RhD  несколько или большинство экзонов гена RHD  отсутствуют, однако, несколько эпитопов  RhD  всё же экспрессируются.

     К счастью, такие варианты гена редки, но есть один, особенно важный, псевдоген  RHDψ,  –  он обычен для людей африканского происхождения: приблизительно у 66% африканцев резус-фактор отрицателен, и у 24% из них – RHDψ. RHDψ  содержит все 10 экзонов, но он неактивен из-за двух инактивирующих мутаций  –  повтора фрагмента размером 37 п.о. в экзоне 4 и нонсенс-мутации (Y269X) в экзоне 6.  Встречаемость псевдо-резуса в европейских и азиатских популяциях чрезвычайно мала.

 

Неинвазивный метод определения резус-фактора плода

     Используемые в настоящее время для диагностики перечисленных заболеваний методы либо неточны, либо связаны с травмирующими инвазивными процедурами и риском прерывания беременности. Но в последние годы получила развитие разработка безопасных и одновременно точных методов, связанных с циркулирующими в крови беременной нуклеиновыми кислотами плода.

 

Внеклеточные нуклеиновые кислоты

Появляется фетальная (от англ. «fetal»  –  плод) ДНК в кровотоке уже на первом месяце беременности. В целом, внеклеточные ДНК плода составляют 3–5% от всех циркулирующих в крови беременной внеклеточных ДНК при выделении их из плазмы. Это значительно затрудняет задачу исследователя при определении специфичных плодных локусов, но современные молекулярно-генетические методы позволяют использовать это открытие для неинвазивной пренатальной диагностики (гена  RHD  у плода с положительным резус-фактором)  с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.

 

Чувствительность ПЦР  дает  возможность  определить наличие в плазме беременной ДНК плода, содержащей фрагменты гена  RHD  (кодирует белок  RhD). Обнаружение таких фрагментов ДНК в плазме беременной позволяет сделать заключение о наличии резус-факторе плода, так как у резус-отрицательных женщин в геноме полностью отсутствуют определяемые генетические маркеры.

 

Для решения задачи идентификации ДНК плода в крови матери использован подход на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией результатов ПЦР в реальном времени.  Амплификации подвергаются участки пятого и седьмого экзона гена RHD. В качестве общего контроля используется ген GADPH.

 

Разработанный метод позволяет детектировать наличие 10 и более копий исследуемых участков в реакционной смеси, но малое содержание в плазме плодной ДНК предъявляет особые требования к качеству выделения материала.

 

Известно, что в первом триместре концентрация внеклеточной ДНК плода в крови матери составляет в среднем 3,4% от  общего количества циркулирующих нуклеиновых кислот (CI  95% 0,39-11,9%), что позволяет оценить необходимый объем плазмы для выделения.  Стандартные методы выделения, присутствующие на рынке, позволяют выделить приблизительно 2000-3000 копий общей циркулирующей ДНК из 1 миллилитра плазмы (включающей ДНК матери и ДНК плода), что дает содержание плодной ДНК в выделенных образцах от 10 до 300 копий.

 

Таким образом, минимальный объем выделения, гарантирующий корректную работу диагностического набора и надежные результаты, составляет 1 миллилитр плазмы, рекомендуемый – 2-4 миллилитра.

 

Выделение из меньших объемов возможно только на более поздних сроках (не ранее 16-17 недель), когда концентрация плодной ДНК возрастает до 10-15% от общего содержания циркулирующих нуклеиновых кислот.

 

Анализ на неинвазивное определение гена резус-фактора плода рекомендуется проводить для резус-отрицательных женщин, начиная с 10-й недели беременности.

 

При соблюдении указанных сроков  вероятность правильного определения составляет более 99%. В редких случаях из-за индивидуальных особенностей содержание внеклеточной ДНК в плазме беременной женщины на сроках 10-11 недель низкое. В этих случаях результат может быть сомнительным, рекомендуется сдать кровь на анализ повторно через2-3 недели.

Ваше имя*  
Сообщение  
Ваш телефон  
Ваш e-mail  
 
Адрес:
г.Москва, Подольское шоссе,
дом 8, корпус 5 (метро Тульская)
График работы:
Пн.-Пт.: с 8.00 до 19.00
Сб.: с 8.00 до 17.00
Вс.: с 8.00 до 15.00
Лицензия № ЛО-77-01-010099 от 21 апреля 2015 г Квитанция на оплату, вышестоящие огранизации Правила предоставления платных мед. услуг.
8 (495) 660-83-77 Обратный звонок
Дизайн и разработка сайта
"Сайт-консалтинг"


Яндекс.Метрика
© 2015 - Геномед - медико-генетический центр